ImmunoFluorescentie Assay, een goede manier om tissue te kleuren

Immunofluorescentie (IFA) is een techniek waarmee het verkregen weefsel direct wordt gekleurd en bekeken kan worden met behulp van een fluorescentie microscoop. Deze techniek maakt gebruik van antilichamen die fluorescent gelabeld zijn, en binden aan het biologische antigeen in het celweefsel. IFA wordt veel gebruikt in de immunohistochemie. IFA kan gebruikt worden op celweefsel, gekweekte cellijnen en individuele cellen.

Methodes

Binnen de IFA bestaan er twee methodes; de directe en de indirecte techniek. Tijdens de directe methode wordt het gelabelde antilichaam direct gekoppeld aan het target in de cel, dat het mogelijk maakt om deze uit te lezen met de fluorescentie microscoop. Voordelen van deze methode zijn de korte stappen, snelle procedure, minder last van kruisreactiviteit en hoge mate van specificiteit. Nadeel is de mindere gevoeligheid doordat er minder antilichamen gebonden kunnen worden aan het antigeen dan met de indirecte methode.

Tijdens de indirecte methode wordt wordt eerst een primair antilichaam gekoppeld aan het antigeen waarna er een fluorescent gelabeld secundair antilichaam gekoppeld kan worden aan het primaire antilichaam. Deze methode is gevoeliger omdat er meerdere secundaire antilichamen gekoppeld kunnen worden aan het primaire antilichaam, maar deze methode is complexer en kost meer tijd.

Aan deze techniek zitten wat beperkingen. Verlies in activiteit kan veroorzaakt worden door het blootstellen van de gelabelde cellen aan licht. Dit kan beïnvloed worden door de cellen een kortere tijd bloot te stellen aan licht, een verhoogde concentratie conjugaat te gebruiken of labels te gebruiken die beter bestand zijn tegen licht (bijvoorbeeld Dylight, Alexa Fluors). Immunofluorencentie werkt alleen op gefixeerde, dode cellen omdat antilichamen niet door het celmembraan kunnen.

Zeus Hep 2 guide

Wat is uw mening?

Vul je gegevens in of klik op een icoon om in te loggen.

WordPress.com logo

Je reageert onder je WordPress.com account. Log uit / Bijwerken )

Twitter-afbeelding

Je reageert onder je Twitter account. Log uit / Bijwerken )

Facebook foto

Je reageert onder je Facebook account. Log uit / Bijwerken )

Google+ photo

Je reageert onder je Google+ account. Log uit / Bijwerken )

Verbinden met %s